Paldies, ka apmeklējāt vietni nature.com. Jūsu izmantotajai pārlūkprogrammas versijai ir ierobežots CSS atbalsts. Lai nodrošinātu vislabāko pieredzi, iesakām izmantot jaunāko pārlūkprogrammas versiju (vai izslēgt saderības režīmu pārlūkprogrammā Internet Explorer). Turklāt, lai nodrošinātu nepārtrauktu atbalstu, šajā vietnē netiks iekļauti stili vai JavaScript.
Šajā pētījumā ziņots par ļoti efektīvu benzoksazolu sintēzes metodi, izmantojot kateholu, aldehīdu un amonija acetātu kā izejvielas, izmantojot savienošanas reakciju etanolā ar ZrCl4 kā katalizatoru. Ar šo metodi veiksmīgi sintezēta virkne benzoksazolu (59 veidi) ar iznākumu līdz pat 97%. Citas šīs pieejas priekšrocības ietver liela mēroga sintēzi un skābekļa izmantošanu kā oksidētāju. Vieglie reakcijas apstākļi ļauj veikt sekojošu funkcionalizāciju, kas atvieglo dažādu atvasinājumu ar bioloģiski nozīmīgām struktūrām, piemēram, β-laktāmiem un hinolīna heterocikliem, sintēzi.
Jaunu organiskās sintēzes metožu izstrāde, kas var pārvarēt ierobežojumus augstas vērtības savienojumu iegūšanā un palielināt to daudzveidību (lai pavērtu jaunas potenciālas pielietojuma jomas), ir piesaistījusi lielu uzmanību gan akadēmiskajā vidē, gan rūpniecībā1,2. Papildus šo metožu augstajai efektivitātei, arī izstrādājamo pieeju videi draudzīgums būs būtiska priekšrocība3,4.
Benzoksazoli ir heterociklisku savienojumu klase, kas ir piesaistījusi lielu uzmanību to bagātīgo bioloģisko aktivitāti dēļ. Ir ziņots, ka šādiem savienojumiem piemīt pretmikrobu, neiroprotektīva, pretvēža, pretvīrusu, antibakteriāla, pretsēnīšu un pretiekaisuma iedarbība5,6,7,8,9,10,11. Tos plaši izmanto arī dažādās rūpniecības jomās, tostarp farmācijā, sensorikā, agroķīmijā, ligandu (pārejas metālu katalīzei) un materiālzinātnē12,13,14,15,16,17. Pateicoties to unikālajām ķīmiskajām īpašībām un daudzpusībai, benzoksazoli ir kļuvuši par nozīmīgiem daudzu sarežģītu organisko molekulu sintēzes pamatelementiem18,19,20. Interesanti, ka daži benzoksazoli ir nozīmīgi dabas produkti un farmakoloģiski nozīmīgas molekulas, piemēram, nakijinols21, boxazomicīns A22, kalcimicīns23, tafamidis24, kabotamicīns25 un neosalvianēns (1.A attēls)26.
(A) Benzoksazola bāzes dabisko produktu un bioaktīvo savienojumu piemēri. (B) Daži dabiski kateholu avoti.
Kateholus plaši izmanto daudzās jomās, piemēram, farmācijā, kosmētikā un materiālzinātnē27,28,29,30,31. Ir arī pierādīts, ka kateholiem piemīt antioksidanta un pretiekaisuma īpašības, padarot tos par potenciāliem terapeitiskiem līdzekļiem32,33. Šī īpašība ir novedusi pie to izmantošanas pretnovecošanās kosmētikas un ādas kopšanas līdzekļu izstrādē34,35,36. Turklāt ir pierādīts, ka kateholi ir efektīvi organiskās sintēzes prekursori (1.B attēls)37,38. Daži no šiem kateholiem dabā ir plaši izplatīti. Tāpēc to izmantošana kā izejviela vai sākumviela organiskajai sintēzei var iemiesot zaļās ķīmijas principu "izmantot atjaunojamos resursus". Ir izstrādāti vairāki dažādi veidi, kā pagatavot funkcionalizētus benzoksazola savienojumus7,39. Kateholu C(aril)-OH saites oksidatīvā funkcionalizācija ir viena no interesantākajām un jaunākajām benzoksazolu sintēzes pieejām. Šīs pieejas piemēri benzoksazolu sintēzē ir kateholu reakcijas ar amīniem40,41,42,43,44, ar aldehīdiem45,46,47, ar spirtiem (vai ēteriem)48, kā arī ar ketoniem, alkēniem un alkīniem (2.A attēls)49. Šajā pētījumā benzoksazolu sintēzei tika izmantota daudzkomponentu reakcija (MCR) starp kateholu, aldehīdu un amonija acetātu (2.B attēls). Reakcija tika veikta, izmantojot katalītisku ZrCl4 daudzumu etanola šķīdinātājā. Jāņem vērā, ka ZrCl4 var uzskatīt par zaļo Lūisa skābes katalizatoru, tas ir mazāk toksisks savienojums [LD50 (ZrCl4, iekšķīgi žurkām) = 1688 mg kg−1] un netiek uzskatīts par ļoti toksisku50. Cirkonija katalizatori ir veiksmīgi izmantoti arī kā katalizatori dažādu organisko savienojumu sintēzē. To zemās izmaksas un augstā stabilitāte pret ūdeni un skābekli padara tos par daudzsološiem katalizatoriem organiskajā sintēzē51.
Lai atrastu piemērotus reakcijas apstākļus, kā modeļa reakcijas mēs izvēlējāmies 3,5-di-terc-butilbenzol-1,2-diolu 1a, 4-metoksibenzaldehīdu 2a un amonija sāli 3 un veicām reakcijas dažādu Lūisa skābju (LA), dažādu šķīdinātāju un temperatūru klātbūtnē, lai sintezētu benzoksazolu 4a (1. tabula). Bez katalizatora netika novērots produkts (1. tabula, 1. ieraksts). Pēc tam 5 mol.% dažādu Lūisa skābju, piemēram, ZrOCl2·8H2O, Zr(NO3)4, Zr(SO4)2, ZrCl4, ZnCl2, TiO2 un MoO3, tika testēti kā katalizatori EtOH šķīdinātājā, un ZrCl4 tika atzīts par labāko (1. tabula, 2.–8. ieraksts). Lai uzlabotu efektivitāti, tika testēti dažādi šķīdinātāji, tostarp dioksāns, acetonitrils, etilacetāts, dihloretāns (DCE), tetrahidrofurāns (THF), dimetilformamīds (DMF) un dimetilsulfoksīds (DMSO). Visu testēto šķīdinātāju iznākumi bija zemāki nekā etanolam (1. tabula, 9.–15. ieraksts). Izmantojot citus slāpekļa avotus (piemēram, NH4Cl, NH4CN un (NH4)2SO4) amonija acetāta vietā, reakcijas iznākums netika uzlabots (1. tabula, 16.–18. ieraksts). Turpmākie pētījumi parādīja, ka temperatūra zem un virs 60 °C reakcijas iznākumu neuzlaboja (1. tabula, 19. un 20. ieraksts). Kad katalizatora daudzums tika mainīts uz 2 un 10 mol. %, iznākums bija attiecīgi 78 % un 92 % (1. tabula, 21. un 22. ieraksts). Iznākums samazinājās, ja reakcija tika veikta slāpekļa atmosfērā, kas norāda, ka atmosfēras skābeklim varētu būt galvenā loma reakcijā (1. tabula, 23. ieraksts). Amonija acetāta daudzuma palielināšana neuzlaboja reakcijas rezultātus un pat samazināja iznākumu (1. tabula, 24. un 25. ieraksts). Turklāt, palielinot katehola daudzumu, netika novērots reakcijas iznākuma uzlabojums (1. tabula, 26. ieraksts).
Pēc optimālo reakcijas apstākļu noteikšanas tika pētīta reakcijas daudzpusība un pielietojamība (3. attēls). Tā kā alkīniem un alkēniem ir svarīgas funkcionālās grupas organiskajā sintēzē un tos ir viegli tālāk derivatizēt, ar alkēniem un alkīniem tika sintezēti vairāki benzoksazola atvasinājumi (4b–4d, 4f–4g). Izmantojot 1-(prop-2-in-1-il)-1H-indol-3-karbaldehīdu kā aldehīda substrātu (4e), iznākums sasniedza 90%. Turklāt ar augstu iznākumu tika sintezēti alkilhalogenīdie benzoksazoli, kurus var izmantot ligēšanai ar citām molekulām un tālākai derivatizācijai (4h–4i) 52. 4-((4-fluorbenzil)oksi)benzaldehīds un 4-(benziloksi)benzaldehīds deva atbilstošos benzoksazolus 4j un 4k ar augstu iznākumu. Izmantojot šo metodi, mēs veiksmīgi sintezējām benzoksazola atvasinājumus (4l un 4m), kas satur hinolona daļiņas53,54,55. Benzoksazols 4n, kas satur divas alkīna grupas, tika sintezēts ar 84% iznākumu no 2,4-aizvietotiem benzaldehīdiem. Bicikliskais savienojums 4o, kas satur indola heterociklu, tika veiksmīgi sintezēts optimizētos apstākļos. Savienojums 4p tika sintezēts, izmantojot aldehīda substrātu, kas pievienots benzonitrila grupai, kas ir noderīgs substrāts (4q-4r) supramolekulu56 pagatavošanai. Lai uzsvērtu šīs metodes pielietojamību, benzoksazola molekulu, kas satur β-laktāma daļiņas (4q–4r), sagatavošana tika demonstrēta optimizētos apstākļos, izmantojot aldehīda funkcionalizētu β-laktāmu, katehola un amonija acetāta reakciju. Šie eksperimenti parāda, ka jaunizstrādāto sintētisko pieeju var izmantot sarežģītu molekulu vēlīnajai funkcionalizācijai.
Lai vēl vairāk demonstrētu šīs metodes daudzpusību un toleranci pret funkcionālajām grupām, mēs pētījām dažādus aromātiskos aldehīdus, tostarp elektronus ziedojošās grupas, elektronus piesaistošās grupas, heterocikliskos savienojumus un policikliskos aromātiskos ogļūdeņražus (4. attēls, 4s–4aag). Piemēram, benzaldehīds tika pārveidots par vēlamo produktu (4s) ar 92% izolētu iznākumu. Aromātiskie aldehīdi ar elektronus ziedojošām grupām (ieskaitot -Me, izopropilu, terc-butilgrupu, hidroksilgrupu un para-SMe) tika veiksmīgi pārveidoti par atbilstošajiem produktiem ar lielisku iznākumu (4t–4x). Steriski apgrūtināti aldehīdu substrāti varēja radīt benzoksazola produktus (4y–4aa, 4al) ar labu līdz lielisku iznākumu. Meta-aizvietotu benzaldehīdu (4ab, 4ai, 4am) izmantošana ļāva pagatavot benzoksazola produktus ar augstu iznākumu. Halogenēti aldehīdi, piemēram, (-F, -CF3, -Cl un Br), deva atbilstošos benzoksazolus (4af, 4ag un 4ai-4an) ar apmierinošu iznākumu. Aldehīdi ar elektronus piesaistošām grupām (piemēram, -CN un NO2) arī labi reaģēja un deva vēlamos produktus (4ah un 4ao) augstā ražā.
Aldehīdu a un b sintēzei izmantotā reakciju sērija. a Reakcijas apstākļi: 1 (1,0 mmol), 2 (1,0 mmol), 3 (1,0 mmol) un ZrCl4 (5 mol%) tika reaģēti EtOH (3 ml) 60 °C temperatūrā 6 stundas. b Iznākums atbilst izolētajam produktam.
Policikliskie aromātiskie aldehīdi, piemēram, 1-naftaldehīds, antracēna-9-karboksaldehīds un fenantrēna-9-karboksaldehīds, varēja radīt vēlamos produktus 4ap-4ar ar augstu iznākumu. Dažādi heterocikliskie aromātiskie aldehīdi, tostarp pirols, indols, piridīns, furāns un tiofēns, labi panesa reakcijas apstākļus un varēja radīt atbilstošos produktus (4as-4az) ar augstu iznākumu. Benzoksazols 4aag tika iegūts ar 52% iznākumu, izmantojot atbilstošo alifātisko aldehīdu.
Reakcijas reģions, izmantojot komerciāli pieejamus aldehīdus a, b. a Reakcijas apstākļi: 1 (1,0 mmol), 2 (1,0 mmol), 3 (1,0 mmol) un ZrCl4 (5 mol. %) tika reaģēti EtOH (5 ml) 60 °C temperatūrā 4 stundas. b Iznākums atbilst izolētajam produktam. c Reakcija tika veikta 80 °C temperatūrā 6 stundas; d Reakcija tika veikta 100 °C temperatūrā 24 stundas.
Lai vēl vairāk ilustrētu šīs metodes daudzpusību un pielietojamību, mēs testējām arī dažādus aizvietotus kateholus. Monosubstituēti kateholi, piemēram, 4-terc-butilbenzol-1,2-diols un 3-metoksibenzol-1,2-diols, labi reaģēja ar šo protokolu, iegūstot benzoksazolus 4aaa–4aac ar attiecīgi 89%, 86% un 57% iznākumu. Daži polisubstituēti benzoksazoli tika veiksmīgi sintezēti arī, izmantojot atbilstošos polisubstituētos kateholus (4aad–4aaf). Izmantojot elektrondeficītus aizvietotus kateholus, piemēram, 4-nitrobenzol-1,2-diolu un 3,4,5,6-tetrabrombenzol-1,2-diolu (4aah–4aai), produkti netika iegūti.
Benzoksazola sintēze gramu daudzumos tika veiksmīgi paveikta optimizētos apstākļos, un savienojums 4f tika sintezēts ar 85% izolētu iznākumu (5. attēls).
Benzoksazola 4f sintēze grama mērogā. Reakcijas apstākļi: 1a (5,0 mmol), 2f (5,0 mmol), 3 (5,0 mmol) un ZrCl4 (5 mol%) tika reaģēti EtOH (25 ml) 60 °C temperatūrā 4 stundas.
Pamatojoties uz literatūras datiem, ir ierosināts pamatots reakcijas mehānisms benzoksazolu sintēzei no katehola, aldehīda un amonija acetāta ZrCl4 katalizatora klātbūtnē (6. attēls). Katehols var helatēt cirkoniju, koordinējot divas hidroksilgrupas, veidojot katalītiskā cikla pirmo kodolu (I)51. Šajā gadījumā semihinona fragmentu (II) var veidot, izmantojot enol-keto tautomerizāciju kompleksā I58. Starpproduktā (II) veidotā karbonilgrupa acīmredzot reaģē ar amonija acetātu, veidojot starpproduktu imīnu (III) 47. Cita iespēja ir tāda, ka imīns (III^), kas veidojas aldehīda reakcijā ar amonija acetātu, reaģē ar karbonilgrupu, veidojot starpproduktu imīna-fenolu (IV) 59,60. Pēc tam starpprodukts (V) var tikt pakļauts intramolekulārai ciklizācijai40. Visbeidzot, starpprodukts V tiek oksidēts ar atmosfēras skābekli, iegūstot vēlamo produktu 4 un atbrīvojot cirkonija kompleksu, lai sāktu nākamo ciklu61,62.
Visi reaģenti un šķīdinātāji tika iegādāti no komerciāliem avotiem. Visi zināmie produkti tika identificēti, salīdzinot ar testēto paraugu spektrālajiem datiem un kušanas temperatūrām. 1H NMR (400 MHz) un 13C NMR (100 MHz) spektri tika reģistrēti ar Brucker Avance DRX instrumentu. Kušanas temperatūras tika noteiktas ar Büchi B-545 aparātu atvērtā kapilārā. Visas reakcijas tika uzraudzītas ar plānslāņa hromatogrāfiju (TLC), izmantojot silikagela plāksnes (Silica gel 60 F254, Merck Chemical Company). Elementu analīze tika veikta ar PerkinElmer 240-B mikroanalizatoru.
Katehola (1,0 mmol), aldehīda (1,0 mmol), amonija acetāta (1,0 mmol) un ZrCl4 (5 mol%) šķīdumu etanolā (3,0 ml) secīgi maisīja atvērtā mēģenē eļļas vannā 60 °C temperatūrā gaisa atmosfērā nepieciešamo laiku. Reakcijas gaitu uzraudzīja ar plānslāņa hromatogrāfiju (TLC). Pēc reakcijas pabeigšanas iegūtais maisījums tika atdzesēts līdz istabas temperatūrai un etanols tika atdalīts pazeminātā spiedienā. Reakcijas maisījumu atšķaidīja ar EtOAc (3 x 5 ml). Pēc tam apvienotos organiskos slāņus žāvēja virs bezūdens Na2SO4 un koncentrēja vakuumā. Visbeidzot, neapstrādāto maisījumu attīrīja ar kolonnas hromatogrāfiju, izmantojot petrolēteri/EtOAc kā eluentu, lai iegūtu tīru benzoksazolu 4.
Rezumējot, mēs esam izstrādājuši jaunu, vieglu un videi draudzīgu protokolu benzoksazolu sintēzei, secīgi veidojot CN un CO saites cirkonija katalizatora klātbūtnē. Optimizētos reakcijas apstākļos tika sintezēti 59 dažādi benzoksazoli. Reakcijas apstākļi ir saderīgi ar dažādām funkcionālajām grupām, un tika veiksmīgi sintezēti vairāki bioaktīvi kodoli, kas norāda uz to augsto potenciālu turpmākai funkcionalizācijai. Tādēļ mēs esam izstrādājuši efektīvu, vienkāršu un praktisku stratēģiju dažādu benzoksazola atvasinājumu ražošanai lielos apjomos no dabīgiem kateholiem videi draudzīgos apstākļos, izmantojot lētus katalizatorus.
Visi šajā pētījumā iegūtie vai analizētie dati ir iekļauti šajā publicētajā rakstā un tā papildinformācijas failos.
Nikolaou, Kanzassitija. Organiskā sintēze: dabā sastopamu bioloģisko molekulu kopēšanas un līdzīgu molekulu radīšanas laboratorijā māksla un zinātne. Proc. R Soc. A. 470, 2013069 (2014).
Ananikovs V. P. u.c. Jaunu mūsdienīgas selektīvās organiskās sintēzes metožu izstrāde: funkcionalizētu molekulu iegūšana ar atomāru precizitāti. Russ Chem. Ed. 83, 885 (2014).
Ganešs, K. N. u.c. Zaļā ķīmija: ilgtspējīgas nākotnes pamats. Organic, Process, Research and Development 25, 1455.–1459. lpp. (2021. g.).
Yue, Q., et al. Organiskās sintēzes tendences un iespējas: globālo pētniecības rādītāju stāvoklis un progress precizitātes, efektivitātes un zaļās ķīmijas jomā. J. Org. Chem. 88, 4031–4035 (2023).
Lī, SJ un Trosts, BM Grīna ķīmiskā sintēze. PNAS. 105, 13197–13202 (2008).
Ertan-Bolelli, T., Yildiz, I. un Ozgen-Ozgakar, S. Jaunu benzoksazola atvasinājumu sintēze, molekulārā dokošana un antibakteriālais novērtējums. Honey. Chem. Res. 25, 553–567 (2016).
Sattar, R., Mukhtar, R., Atif, M., Hasnain, M. un Irfan, A. Benzoksazola atvasinājumu sintētiskās transformācijas un bioskrīnings: apskats. Journal of Heterocyclic Chemistry 57, 2079–2107 (2020).
Jildiz-Oren, I., Jalcin, I., Aki-Sener, E. un Ukarturk, N. Jaunu pretmikrobu iedarbības polisubstituētu benzoksazola atvasinājumu sintēze un struktūras-aktivitātes attiecības. European Journal of Medicinal Chemistry 39, 291–298 (2004).
Akbay, A., Oren, I., Temiz-Arpaci, O., Aki-Sener, E. un Yalcin, I. Dažu 2,5,6-aizvietotu benzoksazola, benzimidazola, benzotiazola un oksazolo(4,5-b)piridīna atvasinājumu sintēze un to inhibējošā aktivitāte pret HIV-1 reverso transkriptāzi. Arzneimittel-Forschung/Drug Res. 53, 266–271 (2003).
Osmanieh, D. u.c. Dažu jaunu benzoksazola atvasinājumu sintēze un to pretvēža aktivitātes pētījums. European Journal of Medicinal Chemistry 210, 112979 (2021).
Rida, SM, et al. Ir sintezēti daži jauni benzoksazola atvasinājumi kā pretvēža, pret-HIV-1 un antibakteriāli līdzekļi. European Journal of Medicinal Chemistry 40, 949–959 (2005).
Demmer, KS un Bunch, L. Benzoksazolu un oksazolopiridīnu pielietojums medicīniskās ķīmijas pētījumos. European Journal of Medicinal Chemistry 97, 778–785 (2015).
Paderni, D., et al. Jauns benzoksazolila bāzes fluorescējošs makrociklisks ķemosensors Zn2+ un Cd2+ optiskai noteikšanai. Chemical Sensors 10, 188 (2022).
Zou Yan et al. Progress benzotiazola un benzoksazola atvasinājumu pētījumos pesticīdu izstrādē. Int. J Mol. Sci. 24, 10807 (2023).
Vu, Y. u.c. Divi Cu(I) kompleksi, kas konstruēti ar dažādiem N-heterocikliskiem benzoksazola ligandiem: sintēze, struktūra un fluorescences īpašības. J. Mol. Struct. 1191, 95–100 (2019).
Walker, KL, Dornan, LM, Zare, RN, Weymouth, RM un Muldoon, MJ. Stirola katalītiskās oksidēšanas mehānisms ar ūdeņraža peroksīdu katjonu pallādija(II) kompleksu klātbūtnē. Journal of the American Chemical Society 139, 12495–12503 (2017).
Agag, T., Liu, J., Graf, R., Spiess, HW un Ishida, H. Benzoksazola sveķi: jauna termoreaktīvo polimēru klase, kas iegūta no viedajiem benzoksazīna sveķiem. Macromolecule, Rev. 45, 8991–8997 (2012).
Basak, S., Dutta, S. un Maiti, D. C2-funkcionalizētu 1,3-benzoksazolu sintēze, izmantojot pārejas metālu katalizētu C–H aktivācijas pieeju. Chemistry – A European Journal 27, 10533–10557 (2021).
Singh, S., et al. Jaunākie sasniegumi farmakoloģiski aktīvu savienojumu, kas satur benzoksazola skeletus, izstrādē. Asian Journal of Organic Chemistry 4, 1338–1361 (2015).
Vongs, K. K. un Jeungs, Kentuki. Patentu apskats par benzoksazola zāļu pašreizējo izstrādes statusu. KhimMedKhim. 16, 3237–3262 (2021).
Ovenden, SPB u. c. Seskviterpenoīdu benzoksazoli un seskviterpenoīdu hinoni no jūras sūkļa Dactylospongia elegans. J. Nat. Proc. 74, 65–68 (2011).
Kusumi, T., Ooi, T., Wülchli, MR, un Kakisawa, H. Jauno antibiotiku boxazomicīnu a, B un CJ struktūras. Am. Chem. Soc. 110, 2954–2958 (1988).
Čeinijs, M. L., Demarko, P. V., Džounss, N. D., un Okolovics, Dž. L. Divvērtīgā katjoniskā jonofora A23187 struktūra. Journal of the American Chemical Society 96, 1932–1933 (1974).
Park, J., et al. Tafamidis: pirmais savā klasē transtiretīna stabilizators transtiretīna amiloidozes kardiomiopātijas ārstēšanai. Annals of Pharmacotherapy 54, 470–477 (2020).
Sivalingam, P., Hong, K., Pote, J. un Prabakar, K. Streptomyces ekstremālos vides apstākļos: potenciāls jaunu pretmikrobu un pretvēža zāļu avots? International Journal of Microbiology, 2019, 5283948 (2019).
Pal, S., Manjunath, B., Gorai, S. un Sasmal, S. Benzoksazola alkaloīdi: sastopamība, ķīmija un bioloģija. Chemistry and Biology of Alkaloids 79, 71–137 (2018).
Šafik, Z. u. c. Bioniskā zemūdens līmēšana un līmes noņemšana pēc pieprasījuma. Applied Chemistry 124, 4408–4411 (2012).
Lī, H., Dellatore, SM, Millers, VM un Mesersmith, PB. Mīdiju iedvesmota virsmas ķīmija daudzfunkcionāliem pārklājumiem. Science 318, 420–426 (2007).
Nasibipour, M., Safai, E., Wrzeszcz, G. un Wojtczak, A. Jauna Cu(II) kompleksa redokspotenciāla un katalītiskās aktivitātes regulēšana, izmantojot O-iminobenzosemikinonu kā elektronu uzglabāšanas ligandu. Nov. Russ. Chemistry, 44, 4426–4439 (2020).
D'Aquila, PS, Collu, M., Jessa, GL un Serra, G. Dopamīna loma antidepresantu darbības mehānismā. European Journal of Pharmacology 405, 365–373 (2000).